Ussing chamber（尤斯灌流室）非常適合用于研究多肽在腸道組織上的透過率（多肽腸吸收）。它是目前評估多肽、藥物等物質腸道滲透特性的標準體外 / 離體模型之一，尤其在口服多肽藥物研發領域應用廣泛。

一、工作原理（為何適合多肽）

Ussing chamber 將離體腸道黏膜（如大鼠、人空腸 / 結腸）固定在兩個充液腔室之間：

·       頂側（Apical, 黏膜側）：模擬腸腔，加入含多肽的供試液。

·       基底側（Basolateral, 漿膜側）：模擬血液 / 組織液，作為接收池。

通過控制溫度、pH、供氧（95% O?+5% CO?），維持組織生理活性。

實驗核心：

·       定時從基底側取樣，檢測多肽濃度

·       計算表觀滲透系數 (Papp, cm/s)：Papp=A?C0dQ/dt

§       dQ/dt：滲透速率

§       A：組織有效面積

§       C0：初始供試濃度

二、用于多肽研究的核心優勢

1、保留完整生理屏障

§       含完整上皮細胞層、緊密連接、刷狀緣肽酶、轉運體（如PepT1）

§       比 Caco-2 細胞模型更貼近體內真實環境，與體內生物利用度相關性更高（R2可達 0.81）

2、直接量化透過率

§       精確測定黏膜→漿膜的凈通量，直接給出透過百分比

§       例：乳清寡肽在仔豬空腸的透過率僅 0.6%~3.35%

§       例：修飾催產肽 P4 在結腸 2 小時透過率達 6.85%

3、機制解析能力強

§       電生理監測（TEER、短路電流）：實時判斷組織完整性

§       可聯用酶抑制劑 / 轉運體抑制劑：區分被動擴散、主動轉運、酶降解

§       研究結構 - 透過性關系：如環化、D - 氨基酸修飾對穩定性與滲透的影響

三、典型實驗流程（多肽）

1.       組織制備：取動物 / 人腸道（空腸常用），去除漿膜 / 肌肉層（可選），洗凈固定

2.       平衡：37℃氧飽和緩沖液孵育 20–30 min，TEER 達標（>30 Ω?cm2）

3.       給藥：頂側加多肽（常加肽酶抑制劑防降解）

4.       取樣：基底側定時取樣（30–120 min）

5.       檢測：HPLC、LC-MS/MS 定量，計算Papp 與累積透過率

四、局限性（需注意）

·       離體組織壽命有限（通常 < 4 小時）

·       種屬差異：動物組織與人腸道存在酶 / 轉運體表達差異

·       多肽易降解：需嚴格控制溫度、pH、酶抑制

·       無法模擬全身循環、肝臟代謝

五、總結

Ussing chamber 是研究多肽腸道透過率的金標準離體模型，能精準量化透過率、解析轉運 / 降解機制，數據與體內高度相關。常用于：

·       口服多肽早期滲透性篩選

·       結構優化（提高穩定性 / 透過率）

·       促滲劑（如 SNAC）效果評價